外泌体是一种直径为30 ~ 150 nm的细胞外小囊泡,它广泛存在于尿液、血液和组织液等体液中。外泌体通过细胞分泌和摄取参与细胞间物质和信息的传递,发挥许多重要的生物学功能。然而,从复杂体系中分离外泌体进行分析仍然是一个巨大的挑战。目前有多种外泌体分离方法,其中免疫亲和法是从复杂培养基中分离外泌体的最佳特异性方法,这取决于结合在磁球或膜上的抗原和抗体的特异性结合。
Figure 1 用于捕获病毒和外泌体的Fe3O4@SiO2-ProteinA-oHSV/CD63免疫磁球
近期,天津大学医学部药物科学与技术学院李优鑫副教授课题组报道了一种Fe3O4@SiO2-Protein A磁球,通过不同种类抗体的修饰,成功用于捕获oHSV病毒和细胞上清液中的外泌体。
该论文首次制备了oHSV-BJ-2-A 抗体修饰的磁球并成功捕获oHSV病毒,结合病毒量为1.92 × 107 ~ 3.44 × 107 PFU/g。
该论文还将Fe3O4@SiO2-Protein A磁球用CD63抗体修饰,首次使用辛酸二琥珀酰亚胺(DSS)作为交联剂固定Protein A与CD63抗体,并成功用于分离和富集细胞上清液中的外泌体。与商品化试剂盒相比,Fe3O4@SiO2-Protein A - CD63 Ab纯化效果更好,提取的外泌体蛋白总含量为3.4 mg/g。此外,Fe3O4@SiO2-Protein A - CD63 Ab具有重复使用性,通过5次循环的结合和洗脱,仍能保持外泌体纯化效果,为大规模纯化外泌体提供了参考。
相关研究成果以“Fe3O4@SiO2-Protein A-oHSV/CD63 Ab for Capturing Virus and Exosomes”为题发表在《Journal of Analysis and Testing》杂志,药学院2020级硕士生郑文青、2022级硕士生郑苹一、赵冉为论文共同第一作者,李优鑫副教授为最后通讯作者,天津大学医学部药物科学与技术学院为第一通讯单位。
论文链接:https://doi.org/10.1007/s41664-024-00310-5